sábado, 10 de enero de 2009

Eosina Azul de Metileno (EMB), Agar (Cultimed)

Se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciación de bacterias entéricas Gram-negativas.

Historia

Los primeros en desarrollar este medio fueron Holt-Harris y Teague, que a partir de la mezcla de azul de metileno y eosina consiguieron un efecto diferenciador muy claro entre las bacterias capaces de fermentar la lactosa y las que no lo
eran. La inclusión de la sacarosa fue propiciada para aquellos microorganismos que fermentan con dificultad la lactosa, y fácilmente la sacarosa.

Fundamento
Por la combinación de estos dos colorantes y los dos hidratosde carbono se pueden distinguir algunos géneros. Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas (Salmonella y Shigella) dan colonias incoloras, mientras que las lactosa y/o sacarosa-positivas dan colonias púrpura-violetanegruzco con/sin un centro oscuro y quedan rodeadas de una zona incolora. Por el efecto de estos mismos colorantes también queda inhibido el crecimiento de la microflora acompañante, sobre todo la Gram-positiva. También es posible la identificación de Candida albicans.

Fórmula (por litro)
Eosina Amarillenta .................................. 0,4 g
Azul de Metileno ..................................... 0,065 g
Lactosa .................................................. 5,0 g
Peptona Bacteriológica........................... 10,0 g
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ................. 2,0 g
Sacarosa ................................................ 5,0 g
Agar........................................................ 13,5 g
pH final: 7,2 ±0,2

Preparación
Suspender 36 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleo
Sembrar en la superficie del medio.Incubar entre 35º y 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químico
Aspecto: polvo fino.
Color: púrpura rosado.
Solubilidad: opalescente con precipitado.
pH: 7,2 ±0,2

Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC y observados a las 24 horas.

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sábado, 22 de noviembre de 2008

MacConkey, Agar (Cultimed)

Medio de cultivo utilizado en la investigación de organismos coliformes.

Historia

Este medio se basa en la fórmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y lactosa para el aislamiento de bacilos entéricos Gram-negativos. El medio ha sufrido múltiples variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adición de otros ingredientes o por la modificación de las proporciones entre ellos. Actualmente corresponde a las recomendaciones de la USP y la Ph. Eur.

Fundamento
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.

Fórmula (por litro)
Lactosa .................................................. 10,0 g
Peptona.................................................. 3,0 g
Sales Biliares .......................................... 1,5 g
Peptona de Gelatina ............................... 17,0 g
Rojo Neutro ............................................ 0,03 g
Sodio Cloruro ......................................... 5,0 g
Violeta Cristal.......................................... 0,001 g
Agar........................................................ 13,5 g
pH final: 7,1 ±0,2

Preparación
Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45ºC y distribuir en placas de Petri estériles con 20 ml en cada una. Dejar solidificar las placas parcialmente destapadas.

Modo de empleo
Sembrar por estría en la superficie de la placa. Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,1 ±0,2
Solubilidad: total.
pH: 7,1 ±0,2

Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC y observados a las 24 horas.

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sábado, 1 de noviembre de 2008

Medio CLED (Cultimed)

Se emplea para el recuento, aislamiento e identificación orientativo de gérmenes en orina. También se emplea como medio de transporte para inóculos en inmersión.

Historia

Sandys fue el primero en trabajar sobre un medio que permitiera la observación de colonias al mismo tiempo que se evitara la aglomeración por Proteus. Más tarde, conjuntamente con Mackey, fueron modificando las formulaciones de los primeros ensayos hasta llegar a la composición actual.

Fundamento
El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentación ácida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las Enterobacteriáceas y el bajo contenido en electrolitos reduce la difusión de Proteus. Las peptonas, el extracto de carne y la Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.

Fórmula (por litro)
Azul de Bromotimol ................................ 0,02 g
L-Cistina ................................................. 0,128 g
Extracto de Carne .................................. 3,0 g
Lactosa .................................................. 10,0 g
Peptona de Caseína ............................... 4,0 g
Peptona de Gelatina ............................... 4,0 g
Agar........................................................ 15,0 g
pH final: 7,3 ±0,2

Preparación
Suspender 36,1 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles.

Modo de empleo
Sembrar por estría en la superficie del medio. Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químico
Aspecto: polvo fino.
Color: beige verdoso.
Solubilidad: total.
pH: 7,3 ±0,2

Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC y observados a las 24 horas.

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